氨基酸(AA)含量測(cè)試盒

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氨基酸(AA)含量測(cè)試盒測(cè)定意義：

動(dòng)物肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官，故尿中氨基酸的變化最能反應(yīng)肝、腎的生理狀態(tài)。另外，氨基酸還能反應(yīng)灼傷、傷寒等方面情況。植物體內(nèi)氨基酸含量對(duì)研究植物在不同條件下及不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期氮代謝變化、植物對(duì)氮素的吸收、運(yùn)輸、同化及營(yíng)養(yǎng)狀況等有重要意義。

測(cè)定原理：

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，在570 nm有特征吸收峰；通過測(cè)定570 nm吸光度，來計(jì)算氨基酸含量。

自備儀器及用品：

臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、無水乙醇、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液，4℃避光保存。

測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到570 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測(cè)定吸光值，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測(cè)定吸光值，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

4. 測(cè)定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，于570nm測(cè)定吸光值，記為A測(cè)定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測(cè)完。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測(cè)定一次。

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